Cell biology and physiology labwork - 4PMBCBP9

Objectif(s)

L'objectif du TP Biologie cellulaire est de maîtriser les techniques de culture cellulaire eukaryote et l'observation qualitative et quantitative de différentes fonctions vitales.

Contenu(s)

Le TP s'articule autour de 2 expériences: Transfection et Mesure des pH intracellulaires

1. Transfection: Pour cette expérience des cellules eukaryotes sont cultivées. Une transfection transitoire avec des plasmides permettant une localisation de protéines ou organelles par fluorescence est faite. Les cellules transfectées sont analysées par microscopie à épifluorescence. Des images sont aquises et analysées.
2. Mesure des pH intracellulaires: Cette expérience est faite avec des levures qui expriment des protéines fluorescentes sensibles au pH (pHluorin) localisées dans le cytosol ou la membrane plasmique. Un marqueur du pH vacuolaire est également utilisé. Une courbe de calibration est réalisée. Les cellules sont soumises à plusieurs inhibiteurs. On mesure la réponse des levures à l'addition de glucose. Des données quantitatives sur les gradients de protons sont ainsi analysées, en lien avec la physiologie cellulaire.

Cours de base en biologie moléculaire et cellulaire