Quantitative cell biology - 4PMBBPH1

Objectif(s)

A partir d'exemples, découvrir les différentes techniques utilisées en biologie pour explorer les fonctions cellulaires, connaître l'organisation dynamique des cellules eucaryotes et apprécier la complémentarité des renseignements obtenus à différentes échelles.

Note : Le cours écrit n'est pas enseigné mais doit être lu et appris par les étudiants. Les BE permettent d'utiliser le cours pour comprendre les articles et développer l'esprit critique et la créativité dans le domaine biomédical.

L'objectif du TP Biologie cellulaire est de maîtriser les techniques de culture cellulaire eukaryote et l'observation qualitative et quantitative de différentes fonctions vitales.

Contenu(s)

• Cours :
  • Les membranes et la compartimentation cellulaire
  • Expression des gènes chez les eucaryotes
  • Dynamique du cytosquelette
  • Trafic membranaire
  • Réplication, réparation et recombinaison de l'ADN

• BE : analyse d'articles
  • Techniques moléculaires à l'échelle cellulaire: expression de protéines fluorescentes, mutants et crible génétique, fractionnement subcellulaire, reconstitution in vitro, suivi in vivo de l'interaction et l'activité de protéines, immunoprécipitation et immunofluorescence, qPCR, RNAseq, ChIPseq, cytométrie en flux

Le TP s'articule autour de 2 expériences: Transfection et Mesure des pH intracellulaires

1. Transfection: Pour cette expérience des cellules eukaryotes sont cultivées. Une transfection transitoire avec des plasmides permettant une localisation de protéines ou organelles par fluorescence est faite. Les cellules transfectées sont analysées par microscopie à épifluorescence. Des images sont aquises et analysées.
2. Mesure des pH intracellulaires: Cette expérience est faite avec des levures qui expriment des protéines fluorescentes sensibles au pH (pHluorin) localisées dans le cytosol ou la membrane plasmique. Un marqueur du pH vacuolaire est également utilisé. Une courbe de calibration est réalisée. Les cellules sont soumises à plusieurs inhibiteurs. On mesure la réponse des levures à l'addition de glucose. Des données quantitatives sur les gradients de protons sont ainsi analysées, en lien avec la physiologie cellulaire.

Cours de biologie moléculaire

Les documents sont accessibles via Chamilo

Contrôle des connaissances

Semestre 8 - L'examen existe uniquement en anglais 

Informations complémentaires

Semestre 8 - Le cours est donné uniquement en anglais